トップページ > 商品情報:製品分類一覧 > 01細胞増殖/細胞毒性測定用試薬 > Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal

Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal
化学名
製品コード SG03

 容 量
    税込価格
本体価格
10
assays
\41,040
 
\38,000
【キット内容】
[10 assays: 35 mm dish]
・SPiDER-βGal ×1
・Bafilomycin A1 ×1
 
 
 
 


ダウンロード


取扱説明書

 
取扱注意
1.保存方法:冷蔵
 
危険・有害性シンボルマーク(GHS表示)
 
 
性 質
正常細胞は、分裂を繰り返すことや、酸化ストレス等によりDNAに損傷を生じる。損傷DNAが修復されない異常細胞がこれ以上増えないようにするため、不可逆的に分裂を停止する細胞老化が引き起こされる。このようにして生じた老化細胞において過剰発現が認められるSA-β-Gal(senescence-associated β-galactosidase)は、老化マーカーの1つとして広く用いられている。代表的なSA-β-Galの検出方法としてX-gal染色が広く利用されているが、(1)細胞膜透過性が乏しいため細胞を固定化する必要がある、(2)染色された細胞とそうでない細胞とを目視により見分ける必要があるため定量性に欠ける、(3)染色に時間を要する、などが課題となっている。
 本キットに含まれるβ-ガラクトシダーゼ検出試薬SPiDER-βGalは、細胞膜透過性が高く、優れた細胞内滞留性を有し反応後の基質が細胞外へ漏れ出さない、という性質を有し、細胞内β-ガラクトシダーゼの高感度検出、短時間染色を実現できる。また、蛍光検出が可能なことから、X-gal染色法では適用できなかったフローサイトメトリーも利用することができ、定量性のあるデータを取得できる。なお、生細胞のみならずX-gal法と同様に固定化細胞を用いてもSA-β-Galを簡便かつ迅速に検出することが可能である。
 
原理
SA-β-Gal検出原理

本キットのβ-ガラクトシダーゼ検出試薬SPiDER-βGalは、細胞膜透過性を有するため、特別な膜透過処理や固定化操作は不要で生細胞に適応できる。細胞膜を透過したSPiDER-βGalは、SA-β-Galと反応することで蛍光を発し、かつ近傍のタンパク質と共有結合する。また、SPiDER-βGalを添加する前に本キットに含まれるBafilomycin A1を添加することで、生細胞中の内在性β-ガラクトシダーゼの活性を抑制し、バックグラウンド抑えた状態でSA-β-Galを蛍光検出できる。



キットの使用手順
SA-β-Galの染色操作



特長@.生細胞も固定化細胞も適用できる
SA-β-Galを生細胞・固定化細胞で検出
固定化細胞の場合、Bafilomycin A1を添加する必要はなく、取扱説明書に記載された手順に従うことでSA-β-Galを検出できる。

※Bafilomycin A1 を添加する理由(FAQ)



特長A.定量が容易にできる

○従来法(X-Gal法)では
目視による判断のため、客観的な測定が難しい。
○本キットでは
蛍光による検出なのでフローサイトメトリーによる定量解析ができる。
X-Gal法ではできないことが同仁ではできる
同仁は老化細胞を定量測定できる



細胞の指標について

老化細胞マーカー

SA-β-Gal
CDKis

p53 gene
SASP

DDR

(senescence-associated beta-galactosidase)
(cyclin-dependent kinase inhibitor)
ex. p16, p21 .etc

(Senescence-Associated Secretory Phenotyp)
ex. IL6, IL8 .etc
(DNA damage response)
ex. γ-H2AX, ATM, .etc

細胞老化を評価する際には、複数の老化細胞マーカーを指標に解析する必要がある。左表に示したマーカーは細胞老化研究分野で広く用いられるマーカーの一例であるが、その中でもSA-β-Galは簡便に測定できることから、老化細胞の検出指標として汎用されている。



異なる老化細胞マーカーとの相関
継代数が異なるWI-38細胞を用いて、本キットによりSA-β-Galを蛍光染色した(上段)。同様にWI-38細胞を用いて老化細胞のマーカーとしてDNA損傷(γ-H2AX)を指標に免疫染色にて評価したところ、本キットによるSA-β-Gal染色と相関する結果が得られた(下段)。
上段: 細胞:WI-38
青:Hoechst33342 による核染色
緑:本キットによるSA-β-Gal染色
   ex488 nm,  em500-600 nm

下段: 細胞:WI-38
赤:ɤ-H2AX抗体によるDNA損傷マーカーの免疫染色
   一次抗体:anti-γ-H2AX,
   二次抗体:蛍光標識 anti-rabbit



蛍光特性(β-ガラクトシダーゼと反応後のSPiDER-βGal)
β-galactosidaseと反応後のSPiDER-βGalの励起・蛍光スペクトル
β-ガラクトシダーゼと反応後のSPiDER-βGalの励起・蛍光スペクトル


  

Q&A 
Bafilomycin A1 を添加する理由
DMSO stock solutionの安定性
Working solutionの安定性
プレート毎での使用回数の目安
固定化した細胞の検出可否
固定化細胞でのフローサイトメーター検出法
染色後の蛍光が確認できない又は蛍光が弱い場合の対応について
染色後の細胞固定化の可否
培地中成分(血清、フェノールレッド)の影響
 
備 考
 
 
関連商品はこちらをクリックしてください。
 
01細胞増殖/細胞毒性測定用試薬


 
ページの上部へ戻る