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Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging
化学名 N-[10-(9,10-Dimethylanthracen-2-yl)-7-(dimethylamino)-5,5-dimethyldibenzo[b,e]silin-3(5H)-ylidene]-N-methylmethanaminium, chloride
CAS番号 1621598-01-3
製品コード MT05

 容 量
    税込価格
本体価格
2
μg
\21,600
 
\20,000
 
 
 
C35H37ClN2Si=549.22
 


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取扱説明書

プロトコル

 性 質
活性酸素種の一つであり非常に強い酸化力を持つ一重項酸素は、皮膚のシミやシワの原因となることが知られており、化粧品分野ではこの一重項酸素を消去する化合物の探索が進められている。一方、医学分野、特に癌の治療においては、光感受性物質とレーザー照射により発生した一重項酸素の酸化力により癌細胞を破壊する光線力学的治療の研究が進められており、細胞内における一重項酸素レベルをモニターできる試薬が望まれている。しかしながら既存の一重項酸素検出試薬は細胞膜を透過しない為、細胞内の一重項酸素を検出することができない。
 真嶋らが開発した一重項酸素検出試薬 Si-DMAは、silicon rhodamine(SiR)骨格を蛍光団とし、一重項酸素反応部位としてアントラセンを有した構造を持つ蛍光プローブであり、このSi-DMAは、容易に細胞膜透過しミトコンドリアに集積後、選択的に一重項酸素と応答して強い蛍光を発する。このことからSi-DMAは、細胞内一重項酸素のリアルタイムイメージングが可能な蛍光色素として今後の研究への応用が期待される。
Si-DMAの細胞染色原理



Si-DMEPの励起蛍光スペクトル




Si-DMAの反応特異性

各種活性酸素種および活性窒素種への応答性を比較したところ、Si-DMAは一重項酸素に選択的に応答を示し、蛍光強度比が8倍以上増加することが確認された。

<比較条件>
PBS(pH7.4):メタノール=1:1
Si-DMA:終濃度1μmol/l
ROS:10 mmol/l
RNS:10 mmol/l




5-ALAで処理したHeLa細胞のSi-DMAによる一重項酸素の検出
HeLa細胞への5-amindevulinic acid(5-ALA)処理により、ミトコンドリア内でプロトポルフィリンIXを生成。蛍光顕微鏡の励起光照射により発生した一重項酵素にSi-DMAが応答したことを確認した。

フィルター(励起波長/蛍光波長)
蛍光イメージング: 600±25 nm (Ex), 685±25 nm (Em)

 


ミトコンドリアにおける一重項酸素検出
Si-DMA
MitoBright Green
(ミトコンドリア染色)
Merged

HeLa細胞への刺激(過酸化水素50 μmol/l及び次亜塩素酸50 μmol/l添加)の有無で、
細胞内に生じた一重項酸素をSi-DMAにより確認した。
またミトコンドリア染色色素(MitoBright Green: MT06)との共染色により、ミトコンドリアにおける
一重項酸素を特異的に検出していることも確認した。

フィルター(励起波長/蛍光波長)
Si-DMA: 600±25 nm / 685±25 nm
MitoBright Green: 488 nm/ 501-563 nm


Q&A 
Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imagingの利点について
Stock solutionの安定性について
Working solutionに使用するバッファーの種類
Working solutionの安定性について
 
参考文献
1) S. Kim, T. Tachikawa, M. Fujitsuka, T. Majima, “Far-Red Fluorescence Probe for Monitoring Singlet Oxygen during Photodyanamic Therapy”, J. Am. Chem. Soc., 2014, 136 (33), 11707.
2) S. Bekeschus, A. Mueller, U. Gaipl, KD. Weltmann, "Physical plasma elicits immunogenic cancer cell death and mitochondrial singlet oxygen", TRPMS., 2017, 99, DOI:10.1109/TRPMS.2017.2766027.
 
規格
(1) 性状:本品は、青色〜青緑色固体である。
(2) 純度(HPLC): 90.0% 以上
(3) NMRスペクトル: 試験適合
 
取扱注意
1.保存方法:冷蔵,遮光
 
危険・有害性シンボルマーク(GHS表示)
 
 
備 考
(開発元:Dojindo Molecular Technologies, Inc.) 
 
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