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Mito-FerroGreen
化学名
CAS番号 -
製品コード M489

 容 量
    税込価格
本体価格
50
μgx2
\27,000
 
\25,000
 
 
 
 


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取扱説明書

プロトコル

 性 質
鉄は、生体内で最も多く存在する遷移金属元素であり、様々な生理活性を示すことが報告されている。近年、タンパク質非結合型の鉄イオン(自由鉄)としての存在が注目されており、その高い反応性は細胞損傷や細胞死にも関与していることが示唆されている。自由鉄は安定な化学種である鉄(II)イオン及び鉄(III)イオンとして存在するが、生細胞内において、細胞内還元的環境、水溶性、トランスポーターの存在等を考慮すると鉄(III)イオンよりも鉄(II)イオンの挙動を知ることが重要であると考えられている。
Mito-FerroGreen は、FeSクラスターやヘム合成の場として知られるミトコンドリア内の鉄(II)イオンと選択的に反応し強い蛍光(λex=505 nm, λem=535 nm)を発する試薬であり、細胞内鉄(II)イオンのライブセルイメージングに利用することが可能である。

本製品は、岐阜薬科大学薬化学研究室 永澤秀子先生、平山祐先生のご指導の下、製品化した。
定原理






確かなミトコンドリア集積性

Mito-FerroGreen のミトコンドリア内局在を確認するため、ミトコンドリア染色試薬(MitoBright Deep Red)と共染色を行い、Mito-FerroGreen がミトコンドリアを選択的に染色していることを確認した。

Mito-FerroGreen
励起波長:488 nm
蛍光波長:500-565 nm

MitoBright Deep Red
励起波長:640 nm
蛍光波長:656-700 nm
HeLa 細胞に 5 μmol/l Mito-FerroGreen およびミトコンドリア染色試薬 200 nmol/l MitoBright Deep Red( コード︓MT08)を添加し炭酸ガスインキュベータ内で30 分間インキュベート。更に100 μmol/l 硫酸アンモニウム鉄(U)を添加し、炭酸ガスインキュベータ内で1 時間インキュベートし、蛍光イメージングにより観察。




ミトコンドリア内鉄のライブイメージング

血清を含むMEM 増殖培地にて培養したHeLa 細胞へMito-FerroGreen を添加することで、ミトコンドリアに内在する鉄を蛍光にて検出した(左図)。一方、鉄を添加したHeLa 細胞では、Mito-FerroGreen の強い蛍光がみられ(中央図)、鉄キレート試薬と鉄を添加した細胞では、Mito-FerroGreen の蛍光はほどんど見られなかった。この様にミトコンドリア内鉄量の差を蛍光強度の差として確認した。

励起起波︓488 nm
蛍光波長︓500-565 nm
HeLa 細胞に5 μmol/l Mito-FerroGreen を添加し更に炭酸ガスインキュベータ内で30 分間インキュベート(左図)。その後、鉄キレート試薬である10 mmol/l Deferoxamine (DFO) を添加(中央図)、または、10 mmol/l DFO および100 μmol/l硫酸アンモニウム鉄(II)を添加し(右図)、それぞれを炭酸ガスインキュベータ内で1 時間インキュベートしたものを蛍光イメージングにより観察。




Fe2+への高い選択性

Fe2+への高い選択性と高いシグナルが得られる。

50 mmol/l HEPES Buffer (pH7.4) 1 ml中に1 mmol/l Mito-FerroGreen 2 μl、10 mmol/l各種金属 2 μl 及び 1 mg/ml エステラーゼ 20 μlを加え室温にて1時間反応後の蛍光強度を測定。


 励起起波:500 nm
 蛍光波長:535 nm




汎用フィルターに適応


極大励起波長が505 nmにあるMito-FerroGreenは 488 nmでの励起が可能である。

50 mmol/l HEPES Buffer (pH7.4) 3 ml中に1 mmol/l Mito-FerroGreen 6 μl、10 mmol/l硫酸アンモニウム鉄(U)6μl 及び 1 mg/ml エステラーゼ 20 μlを加え37℃にて1時間反応後の蛍光強度を測定。


 励起起波:505 nm
 蛍光波長:535 nm




Q&A 
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参考文献
1) T. Hirayama,  S. Kadota, M. Niwa  and  H. Nagasawa, "A mitochondria-targeted fluorescent probe for selective detection of mitochondrial labile Fe(II)", Metallomics., 2018, DOI: 10.1039/C8MT00049B, ※論文中では「Mito-FerroGreen」を「Ac-MtFluNox」で表記。.
 
規格
(1) 性状:本品はアセトニトリル、メタノール、ジメチルスルホキシドに溶解する。
(2) 純度(HPLC): 90.0% 以上
(3) 蛍光スペクトル: 試験適合
 
取扱注意
1.保存方法:冷凍,遮光, 2.窒素置換,吸湿注意
 
危険・有害性シンボルマーク(GHS表示)
 
 
備 考
 
 
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04細胞内蛍光プローブ


 
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