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DNA Damage Detection Kit - γH2AX - Green
化学名
製品コード G265

 容 量
    税込価格
本体価格
1
set
\36,720
 
\34,000
・Anti γH2AX antibody            ×1
・Secondary antibody - Green        ×1
・Blocking Solution            22 ml×1
 
 
 


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取扱説明書

 性 質
本製品は、DNA ダメージの指標であるγH2AX を二次抗体法で簡便に検出するキットです。初めての方も使い易いよう、検出に必要な試薬をセットにしており、γH2AX を指標とした論文報告や実験例をご紹介します。
DNAダメージの検出原理
DNA ダメージにより二重鎖切断が生じると、ヒストンタンパク質の一種であるH2AX が速やか、かつ広範囲にわたってリン酸化されます。リン酸化H2AX(γH2AX) は、DNA ダメージの鋭敏なマーカーであることから、化学物質や活性酸素、紫外線や放射線などの遺伝毒性及び発がん性評価への応用が期待されています。また、γH2AX の検出は近年では細胞老化を評価する指標としても知られています。
本製品はモノクローナル抗体研究所製の抗γH2AX 抗体を使用しています。

本キットを用いたDNA ダメージの検出原理



キットの特徴

<必要な試薬がセットに>
オールインワンなので、すぐに評価できます。


<簡便な操作>
細胞の固定化と膜透過処理後、キットに同梱している試薬の添加と洗浄操作だけで染色できます。

<3色のラインナップ>
細胞の固定化と膜透過処理後、キットに同梱している試薬の添加と洗浄操作だけで染色できます。



細胞老化の検出例

細胞老化を評価する際は、複数の老化マーカーを指標に解析する必要があります。

<老化細胞の検出報告例>

概要
指標
論文
オートファジー欠損した衛生細胞で細胞老化が認められ、逆にオートファジー誘導剤の添加で細胞老化は抑えられた。
γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 
Laura Garcia-Prat, et. al., Nature, 2016, 529, 37.
二型糖尿病モデルにて、老化マーカーの活性亢進とDNA損傷レベルの増加を確認した。
γH2AX、SA-β-gal、p21 
Milad S. Bitar, et. al., Am J Physiol Endocrinol Metab, 2013, 305(8), E951.
特定のタンパク質(BRE)を欠損させたマウス線維芽細胞においては、特に細胞老化の亢進が見られた。
γH2AX、SA-β–gal
W. Shi, M. K. Tang, Y. Yao, C. Tang, Y. L. Chui and K. K. Lee Sci Rep. , 2016, 6, 23506.
クロマチン構造変異複合体の一つであるSMARCD1の減少を促すパルミチン酸を処理したHepG2細胞において、各老化マーカーの活性が亢進した。
γH2AXγH2AXSA-β-gal、p16、p21 
I. Chisato, et. al., NPJ Aging Mech Dis., 2017, 3, 11.
DNA修復に関わるErcc1遺伝子欠損マウスにおいては、自発なDNA損傷だけでROSレベルの上昇と老化誘導が確認された。
γH2AX、SA-β-gal、p16
R. R. Andria, et. Al., Redox Biology,  2018, 17, 259.


<他マーカーと組合せた細胞の評価例>
DNA Damage Detection Kit
- γH2AX - Deep Red
Merge
<染色条件>
継代数の異なるWI-38 細胞を固定化後、Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal にて染色。
0.1 % Triton-X/PBS を用い膜透過処理後、本キットにてγH2AX を染色。
<検出条件>
γH2AX(Deep Red)
SA-β-gal
DAPI
:Ex. 590-650 nm / Em. 663-738 nm
:Ex. 533-557 nm / Em. 570-640 nm
:Ex. 340-380 nm / Em. 435-485 nm

Q&A 
Anti γH2AX antibody staining solution及びSecondary antibody staining solutionは保存できますか?
抗体をキット付属のBlocking Solution以外の溶液で希釈してもいいですか?
多重染色時の注意点はありますか?
 
取扱注意
1.保存方法:冷蔵, 2.吸湿注意
 
危険・有害性シンボルマーク(GHS表示)
 
 
備 考
 
 
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