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GSSG/GSH Quantification Kit
化学名
製品コード G257

 容 量
    税込価格
本体価格
200
tests
\55,728
 
\51,600
【キット内容】
・ Enzyme Solution  50 μl ×1
・ Coenzyme ×2
・ Buffer Solution  60 ml ×1
・ Substrate (DTNB) ×4
・ Standard GSH   ×1
・ Standard GSSG ×1
・ Masking Reagent  20 μl ×1
 
 
 
 


ダウンロード


取扱説明書

プロトコル

 
取扱注意
1.危険物第4類 第2石油類 危険等級V, 2.安衛法,化審法, 3.火気厳禁 4.保存方法:冷蔵
 
危険・有害性シンボルマーク(GHS表示)
 


 

どくろ
 


腐食性
 

健康有害性
   




 
性 質
グルタチオン(γ-L-glutamyl-L-cysteinylglycine)は生体内に存在するトリペプチドで、glutathione peroxidase、glutathione S-transferaseおよびthiol transferase等の酵素基質として抗酸化や薬物代謝などに関与している。グルタチオンは通常、生体内で還元型(GSH)として存在しているが、酸化ストレスなどの刺激によって還元型(GSH)から酸化型(GSSG)に変換されるため、GSHとGSSGの比率が酸化ストレスの指標として注目されている。
 本キットには、GSHを隠蔽するためのマスキング剤が含まれており、マスキング剤をサンプルに添加することでサンプル内のGSHのみを隠蔽することができる。その後、酵素リサイクリング法を用いたDTNB[5,5'-dithiobis (2-nitrobenzoic acid)]発色(λmax=412 nm)を測定することで、GSSGのみを定量でき、別途、測定した総グルタチオン量からGSSG量を差し引くことでGSH量を求めることが可能となる。
 なお、本キットでの総グルタチオンの測定範囲は0.5〜50 μmol/l、GSSGの測定範囲は0.5〜25 μmol/lである。

特 長
1)酸化型グルタチオン(GSSG)、還元型グルタチオン(GSH)の分別定量が可能である。
2)短時間で簡便に多検体の測定が可能である。

注意事項
キット開封後、各溶液の保存方法・保存期間は下記の通りである。
・Substrate working solution
  溶解後、-20℃にて保存。約2ヶ月使用できる。
・GSH standard solution
  溶解後、-20℃にて保存。約2ヶ月使用できる。
・GSSG standard solution
  溶解後、-20℃にて保存。約2ヶ月使用できる。
・Enzyme working solution
  希釈後、4℃にて保存。約2ヶ月使用できる。
・Coenzyme working solution
  純水で溶解後、-20℃にて保存。約2ヶ月使用できる。
・Masking solution
  エタノールで溶解後、4℃にて保存。約2ヶ月使用できる。


使用方法は、プロトコルを参照いただきたい。
 <キット以外に必要なもの>

・20 μl, 200 μl 可変式マルチチャンネルピペット ・インキュベーター ・プレートリーダー(405 nmあるいは415 nmフィルター)
96穴マイクロプレート ・5-スルホサリチル酸(SSA) ・エタノール


測定原理図






       

還元型グルタチオン(GSH)濃度算出 : GSH濃度=総グルタチオン濃度―(GSSG濃度×2)



操作方法

  

Q&A 
GSH濃度の算出方法
GSSG由来のGSHまでマスキングされないのですか?
Total Gulutathione Quantification Kitとの違いはなんですか?
<トラブルシューティング>発色が弱い場合
グルタチオン以外の酸化ストレスマーカー
このKitで何サンプル測定できますか?
サンプルに着色がある場合の測定方法
サンプルの希釈方法
マスキングの時間
総グルタチオン量のみを測定する場合
測り分けで何がわかるのですか?
 
参考文献
1) M. E. Anderson, "Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide in Biological Samples", Methods in Enzymol., 1985, 113, 548.
2) M. A. Baker, G. J. Cerniglia and A. Zaman, "Microtiter Plate Assay for the Measurement of Glutathione and Glutathione Disulfide in Large Numbers of Biological Samples", Anal. Biochem., 1990, 190, 360.
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4) S. A. McGrath-Morrow and J. Stahl, "Inhibition of Glutamine Synthetase in A549 Cells During Hyperoxia", Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2002, 27, 99.
5) T. Sato, K. Seyama, Y. Sato, H. Mori, S. Souma, T. Akiyoshi, Y. Kodama, T. Mori, S. Goto, K. Takahashi, Y. Fukuchi, N. Maruyama and A. Ishigami, "Senescence Marker Protein-30 Protects Mice Lungs from Oxidative Stress, Aging, and Smoking", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2006, 174, 530.
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8) K. Okabayashi, T. Narita, Y. Takahashi and H. Sugiya, "Effrct of Oxidative Stress on Secretory Function in Salivary Gland Cells", Oxidative Stress-Environmental Induction and Dietary Antioxidants, V. Lushchak, InTech, 2012, 189.
9) G. Tian, J. Sawashita, H. Kubo, S. Nishio, S. Hashimoto, N. Suzuki, H. Yoshimura, M. Tsuruoka, Y. Wang, Y. Liu, H. Luo, Z. Xu, M. Mori, M. Kitano, K. Hosoe, T. Takeda, S. Usami and K. Higuchi, "Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice", Antioxid. Redox Signal., 2014, 20(16), 2606.
10) H. Nakagawa, A. Umemura, K. Taniguchi, J. Font-Burgada, D. Dhar, H. Ogata, Z. Zhong, M. A. Valasek, E. Seki, J. Hidalgo, K. Koike, R. J. Kaufman and M. Karin, "ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development", Cancer cell, 2014, 26(3), 331.
 
備 考
(開発元:Dojindo Molecular Technologies, Inc.) 
 
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