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FerroOrange
化学名
CAS番号 -
製品コード F374

 容 量
    税込価格
本体価格
1
3
tube
tubes

\15,120
\34,560
 
\14,000
\32,000
※ 1 tube当たり24 μgのFerroOrangeが含まれます。
 
 
 


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取扱説明書

 性 質
鉄は、生体内で最も多く存在する遷移金属元素であり、様々な生理活性を示すことが報告されています。近年、タンパク質非結合型の鉄イオン(自由鉄)としての存在が注目されており、その高い反応性は細胞損傷や細胞死にも関与していることが示唆されています。自由鉄は安定な化学種である鉄(II)イオン及び鉄(III)イオンとして存在しますが、生細胞内において、細胞内還元的環境、水溶性、トランスポーターの存在等を考慮すると鉄(III)イオンよりも鉄(II)イオンの挙動を知ることが重要であると考えられています。

FerroOrange は、蛍光顕微鏡およびプレートリーダーにて細胞内の鉄を簡便に検出することができます。試薬を培養細胞に添加するだけで細胞膜を透過し、細胞内のFe2+と選択的に反応し強い蛍光を発します。
本製品は、岐阜薬科大学薬化学研究室 永澤秀子先生、平山祐先生のご指導の下、製品化しました。
鉄検出試薬の選択
鉄検出時の実験方法および測定機器に応じて試薬を選択頂けます。
細胞内の局在
細胞内
ミトコンドリア
蛍光特性
λex : 543 nm、λem : 580 nm
λex : 505 nm、λem : 535 nm
対応装置
(フィルター)
蛍光顕微鏡、プレートリーダー (Cy3)
蛍光顕微鏡 (FITC、GFP)
測定対象
生細胞
生細胞
染色回数
24 μgで35 mm dish 17枚分染色可能
(終濃度 1 μmol/L使用時)
50 μgで35 mm dish 5枚分染色可能
(終濃度 5 μmol/L使用時)



高感度だから内在性の鉄も検出できる
HeLa細胞を用いて、細胞内に内在するFe2+および鉄キレート試薬Bpy(2,2‘-bipyridine、終濃度:100 μmol/L)と鉄(硫酸アンモニウム鉄(II) 、終濃度:100 μmol/L)の添加有無により、細胞内のFe2+の変化をFerroOrangeにより確認しました。

蛍光顕微鏡によるイメージング
鉄キレート試薬を添加することで無刺激の細胞に比べ蛍光強度が低下したことから、細胞内には内在性のFe2+が存在することが確認できました。

<検出条件> Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm      スケールバー:20 μm

プレートアッセイにより簡便に数値化
鉄キレート試薬および鉄の添加による細胞内のFe2+量の変化を数値データとして確認できました。
<検出条件> Ex: 543 nm、Em: 580 nm



Fe2+への高い選択性

50 mmol/L HEPES Buffer(pH7.4) 1 mL中に1 mmol/L FerroOrange 2 μL、10 mmol/L各種金属 2 μLを加え室温にて1時間反応後の蛍光強度を測定。

<検出条件> Ex: 543 nm、Em: 580 nm




蛍光特性

50 mmol/L HEPES Buffer (pH7.4) 3 mL中に1 mmol/L FerroOrange 6 μL、10 mmol/L硫酸アンモニウム鉄(U)6 μLを加え37℃にて1時間反応後の蛍光強度を測定。



各オルガネラ染色試薬との共染色
FerroOrangeと各種細胞内のオルガネラ染色試薬と共染色しました。
HeLa細胞を各種オルガネラ染色試薬で染色し細胞を洗浄。その後、FerroOrangeを細胞へ添加し蛍光顕微鏡にて観察しました。

ER染色試薬との共染色

FerroOrange
ER染色試薬
Merge
<検出条件>
FerroOrange: Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm
ER Tracker Green(ER染色試薬): Ex: 488 nm、Em: 510-555 nm
Scale bars: 10 μm

ミトコンドリア染色試薬との共染色
FerroOrange
ミトコンドリア染色試薬
Merge
<検出条件>
FerroOrange: Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm
MitoBright Deep Red(ミトコンドリア染色試薬): Ex: 640 nm、Em: 650-700 nm
Scale bars : 10 μm

ゴルジ複合体染色試薬との共染色
FerroOrange
ゴルジ複合体染色試薬
Merge
<検出条件>
FerroOrange: Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm
BODIPY FL(ゴルジ複合体染色試薬): Ex: 488 nm、Em: 510-555 nm
Scale bars: 10 μm


よくあるご質問 
FerroOrangeで染色する時の注意点を教えて下さい。
プレートリーダーでの測定方法を教えてください。
推奨のフィルターを教えてください。
 
規格
(1) 性状:本品はアセトニトリル、メタノール、ジメチルスルホキシドに溶解する。
(2) 純度(HPLC): 92.0% 以上
(3) 蛍光スペクトル: 試験適合
 
取扱注意
1.保存方法:冷蔵,遮光
 
備 考
 
 
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04細胞内蛍光プローブ


 
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