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      Cell Counting Kit-8
化学名
製品コード CK04

 容 量
    税込価格
本体価格
和光コード
100
500
2500
10000
回用
回用
回用
回用



\5,616
\14,256
\39,528
\109,080
 
\5,200
\13,200
\36,600
\101,000
341-07761
347-07621
343-07623
【キット内容】 
-WST-8, 1-Methoxy PMSの混合溶液-
[100回用]      1ml×1
[500回用]      5ml×1
[2500回用]     5ml×5
[10000回用]   100ml×1
 
 
 
 


ダウンロード


取扱説明書

プロトコル

パンフレット

 
取扱注意
1.保存方法:冷蔵,遮光
 
危険・有害性シンボルマーク(GHS表示)
 
 
性 質
Cell Counting Kit-8は細胞増殖または化学物質の感受性試験において、細胞数を測定するキットである。高感度水溶性ホルマザンを生成する新規テトラゾリウム塩WST-8を発色基質として採用することで、従来のCell Counting Kitより高感度測定が可能になった。WST-8は細胞内脱水素酵素により還元され、水溶性のホルマザンを生成する。このホルマザンの450 nmの吸光度を直接測定することにより、容易に生細胞数を計測することができる。細胞数と生成するホルマザンの量は直線的な比例関係にある。1ボトル溶液タイプとし、より使いやすくなった。

特 長 
1) [3H]-チミジン取り込み法のようなラジオアイソトープを必要としない。
2) テトラゾリウム塩およびホルマザンとも高水溶性であるため、MTTアッセイのようなホルマザンの溶解操作が不要である。
3) 他の水溶性タイプのテトラゾリウム塩(XTT、MTS)より高感度・低毒性である。
4) 1ボトル溶液タイプであるため、試薬の調製が不要である。
5) 他の測定キットより試薬が安定である。
6) フェノールレッドを含む培地でも使用できる。
 
各項目に測定データを掲載しています(クリックで移動)
1. 測定原理
2. 測定手順
3. Cell Counting Kit-8を用いた測定例
4. Cell Counting Kit-8 とCytotoxicity LDH Assay Kit-WST を併用した細胞毒性試験
5. 細胞数とWST-8ホルマザン由来の吸光度の関係
6. 試薬の安定性比較
7. 試薬の細胞毒性比較
8. WST-8ホルマザンの吸収スペクトル



1. 測定原理




Cell Counting Kit-8にはテトラゾリウム塩(WST-8)と電子伝達物質(1-Methoxy PMS)が含まれ
ている。WST-8は、高い水溶性を有するため生細胞膜を透過せず細胞外に存在し、乳酸脱水
素酵素の補酵素であるNADHから1-Methoxy PMSを介して電子を受け取ることで還元されて
水溶性のWST-8ホルマザン(極大吸収波長450 nm: 下記の吸収スペクトル参照)を生成する。


2. 測定手順


簡便な測定手順に加えて、必要な試薬を含む1ボトル溶液タイプのため、Working solutionなど
の試薬調製が不要で更に時間を節約することができる。


3. Cell Counting Kit-8を用いた測定例

細胞増殖試験(左)と細胞毒性試験(右)
   


4. Cell Counting Kit-8 とCytotoxicity LDH Assay Kit-WST を併用した細胞毒性試験


 
     試験物質: Mitomycin C
     細胞: HeLa
     使用培地: MEM, 10% FBS
     インキュベート: 37℃, 5% CO2, 48時間
     検出波長: Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST (490 nm)

HeLa 細胞にMitomycin C を添加した際の細胞毒性をCell Counting Kit-8とCytotoxicity
LDH Assay Kit-WST [Code: CK12]を用いて測定した。Cell Counting Kit-8による細胞内
代謝活性を指標とした方法とCytotoxicity LDH Assay Kit-WSTを用いた細胞膜損傷によ
る遊離LDHを指標とした方法では各々の指標が異なるため、細胞毒性が表れる薬剤濃度
に違いがあることが確認された。


論文には別指標(遊離LDH法など)の毒性データが望まれています。 [関連記事]



5. 細胞数とWST-8ホルマザン由来の吸光度の関係
Medium:
Incubation:
Detection:
MEM, 10%FBS(HeLa ) , RPM1640(HL60)
37℃, 5%CO2, 2hr (HeLa、HL60)
Cell Counting Kit-8
() 450 nm, XTT () 450 nm, MTS
() 490 nm, MTT() 570 nm

HeLa細胞およびHL60細胞を種々の細胞数で96ウェルプレートに播種し、各試薬を添加して
インキュベート後の吸光度を測定した。細胞数に応じて吸光度が増加すること、また、細胞の
種類によって吸光度の値に違いがあることが確認された。


6. 試薬の安定性比較


Cell Counting Kit-8は、冷蔵保存で1年間安定であるため、無駄を減らすことができる。



7. 試薬の細胞毒性比較


96ウェルプレートにHeLa細胞を播種(5,000 cells/well)して前培養した後、各試薬溶液を
添加した。CO2インキュベーター内で呈色反応を開始して、3, 6, 24時間毎に顕微鏡を用
いて細胞の形態を観察した。Cell Counting Kit-8は24時間後も殆どの細胞の形態に変
化は認められなかった。薬剤等を用いた細胞毒性試験において、測定試薬自身が細胞
毒性に与える影響が極めて低い試薬を選択することが望ましい。


8. WST-8ホルマザンの吸収スペクトル


  

Q&A 
96well以外のプレートでの測定
CCKシリーズの違い
CCKとMTTの違い
ブランクの測定
前培養は必要ですか?
阻害物質
反応停止方法
保存期間を教えて
 
参考文献
1) M. Ishiyama, Y. Miyazono, K. Sasamoto, Y. Ohkura and K. Ueno, "A Highly Water-Soluble Disulfonated Tetrazolium Salt as a Chromogenic Indicator for NADH as Well as Cell Viability", Talanta., 1997, 44, 1299.
2) H. Tominaga, M. Ishiyama, F. Ohseto, K. Sasamoto, T. Hamamoto, K. Suzuki and M. Watanabe, "A water-soluble tetrazolium salt useful for colorimetric cell viability assay", Anal. Commun., 1999, 36, 47.
3) T. Miyamoto, W. Min and H. S. Lillehoj, "Lymphocyte Proliferation Response During Eimeria tenella Infection Assessed by a New, Reliable, Nonradioactive Colorimetric Assay", Avian Dis., 2002, 46, 10.
4) K. Yoshimura, A. Tanimoto, T. Abe, M. Ogawa, T. Yutsudo, M. Kashimura and S. Yoshida, "Shiga toxin 1 and 2 Induce Apoptosis in the Amniotic cell line WISH", J. Soc. Gynecol. Investig., 2002, 9, 22.
5) Y. Hayakawa, Y. Hirata, H. Nakagawa, K. Sakamoto, Y. Hikiba, H. Kinoshita, W. Nakata, R. Takahashi, K. Tateishi, M. Tada, M. Akanuma, H. Yoshida, K. Takeda, H. Ichijo, M. Omata, S. Maeda and K. Koike, "Apoptosis signal-regulating kinase 1 and cyclin D1 compose a positive feedback loop contributing to tumor growth in gastric cancer", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2011, 108, (2), 780.
6) R. Chugh, V. Sangwan, S. P. Patil, V. Dudeja, R. K. Dawra, S. Banerjee, R. J. Schumacher, B. R. Blazar, G. I. Georg, S. M. Vickers and A. K. Saluja, "A Preclinical Evaluation of Minnelide as a Therapeutic Agent Against Pancreatic Cancer", Sci. Transl. Med., 2012, 4, (156), 156ra139.
7) R. Kang, T. Loux, D. Tang, N. E. Schapiro, P. Vernon, K. M. Livesey, A. Krasinskas, M. T. Lotze and H. J. Zeh III, "The expression of the receptor for advanced glycation endproducts (RAGE) is permissive for early pancreatic neoplasia", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2012, 109, (18), 7031.
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9) K. Takayam, Y. Morisaki, S. Kuno, Y. Nagamoto, K. Harada, N. Furukawa, M. Ohtaka, K. Nishimura, K. Imagawa, F. Sakurai, M. Tachibana, R. Sumazaki, E. Noguchi, M. Nakanishi, K. Hirata, K. Kawabata and H. Mizuguchi, "Prediction of interindividual differences in hepatic functions and drug sensitivity by using human iPS-derived hepatocytes", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2014, 111, (47), 16772.
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12) T. Tu, C. Zhang, H. Yan, Y. Luo, R. Kong, P. Wen, Z. Ye, J. Chen, J. Feng, F. Liu, J. Y Wu and X. Yan, "CD146 acts as a novel receptor for netrin-1 in promoting angiogenesis and vascular development", Cell Res., 2015, 25, (3), 275.
13) S. Ji, Y. Qin, S. Shi, X. Liu, H. Hu, H. Zhou, J. Gao, B. Zhang, W. Xu, J. Liu, D. Liang, L. Liu, C. Liu, J. Long, H. Zhou, P J Chiao, J. Xu, Q. Ni, D. Gao and X. Yu, "ERK kinase phosphorylates and destabilizes the tumor suppressor FBW7 in pancreatic cancer", Cell Res., 2015, 25, (5), 561.
 
備 考
 
 
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