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ACE Kit - WST
化学名
製品コード A502

 容 量
    税込価格
本体価格
100
tests
\75,600
 
\70,000
【キット内容】
[100 tests]
・Substrate Buffer   1 ml×2
・Enzyme A          ×2
・Enzyme B          ×2
・Enzyme C          ×2
・Coenzyme          ×2
・Indicator Solution   5 ml×2  
 
 
 


ダウンロード


取扱説明書

プロトコル

 
取扱注意
1.保存方法:冷蔵
 
危険・有害性シンボルマーク(GHS表示)
 
 
性 質
本キットはアンジオテンシンT変換酵素(ACE)の阻害活性を測定するためのキットである。
 ACEは、血圧調節メカニズムの一つであるレニン-アンジオテンシン系において、アンジオテンシンTから昇圧作用を有するアンジオテンシンUを生成し、同時に降圧ペプチドであるブラジキニンを分解するなど、血圧上昇に大きく関与している酵素である。近年、高血圧予防を目的とした数多くの機能食品(機能性表示食品、特定保健用食品)が販売されるなど、ACE阻害作用を有する食品成分が注目を集めている。
 従来、ACE阻害活性は合成基質Hippuryl-His-Leuから切り出されてくる馬尿酸を酢酸エチルで溶媒抽出後、濃縮乾固し、再溶解して228 nmの吸光度を測定することで算出される。しかし、酢酸エチルのような有害な有機溶媒を用いることと、操作が煩雑であり測定誤差が生じやすい方法であるため改良が望まれていた。
 本キットは3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly (3HB-GGG)から切り出されてくる3-Hydroxybutyric acid (3HB)を酵素法により検出するもので、96穴マイクロプレートに対応しており、一度に多検体の測定が可能である。また、有害な有機溶媒を使用しないので、安全で迅速・簡便であり、再現性の高い測定方法である。Alauddinらは加工豆乳に含まれるACE阻害性ペプチドに着目しラットを用いた実験にて血圧上昇の改善効果があることを、また、Nakabayashiらはアスパラガス中のAsparaptineにACE阻害効果があることを報告している。

*使用方法はプロトコル「ACE阻害活性を測定したい」をご覧下さい。
 
<キット以外に必要なもの>
・プレートリーダー(450 nmフィルター) ・2〜20 μl, 20〜200 μl, 100〜1000 μlのマイクロピペット ・マルチチャンネルピペット
・96穴マイクロプレート ・インキュベーター(37℃) ・ディスポーザブルシリンジ(1 ml)



測定原理





測定時間は2時間

測定操作は、サンプルと試薬をプレートに加え、インキュベーション(60 分、10 分)を行い、吸光度を測定。

60分
インキュベート

10分
インキュベート

サンプル溶液、試薬(2 種)を
各ウェルに添加
発色反応用の試薬を添加
吸光度(450 nm) を測定



従来法との比較

本キットでは 96ウェルマイクロプレートに対応しており、一度に多検体での測定が可能できる。また有害な有機溶媒を使用しないため、安全で迅速・簡便であり、再現性の高い測定が可能である。

比較
ACE Kit-WST
酢酸エチル法(従来法)
操作性
2時間
5時間
サンプル数
多検体(96well)
1検体(キュベット)
有機溶媒の使用
不要
必要



測定例
ヤマトトウキ調製過程におけるACE阻害活性3)

 奈良県農業総合センターの浅尾らは、大和地方で伝統的に行われているヤマトトウキの熟成作業過程毎に
ACE阻害活性(IC50値)を本製品で測定し、作業工程による品質への影響を確認している。
その結果、作業工程毎にACE阻害活性が優位に高まっており、収穫後の調製過程が薬理学的にも重要であることを報告している。

サンプル前処理
 各サンプルを凍結乾燥後、粉砕した粉末に20倍量の蒸留水を加え、40℃で30分間振とう(100 rpm)し、
その後遠心分離(3000 x g、10分間)により得た上澄みをサンプルとした。


     
  



阻害曲線例


測定波長:450 nm
X軸はサンプル調製濃度



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Q&A 
ACEの測定
AlaceprilとCaptoprilの測定例
キットの利点と特長
サンプル数はどれくらい測定できますか?
前処理の方法や注意点を教えて下さい
測定したいサンプルが水に溶けにくいのですが、測定は可能ですか?
測定に影響を与えるような物質にはどのような物がありますか?
反応対象
溶解順が違う場合の影響
 
参考文献
1) L. H. Lam, T. Shimamura, K. Sakaguchi, K. Noguchi, M. Ishiyama, Y. Fujimura and H. Ukeda, "Assay of angiotensin I-converting enzyme-inhibiting activity based on the detection of 3-Hydroxybutyric acid", Anal. Biochem., 2007, 364, 104.
2) L. H. Lam, T. Shimamura, S. Manabe, M. Ishiyama and H. Ukeda, "Assay of Angiotensin I-converting Enzyme-inhibiting Activity Based on the Detection of 3-Hydroxybutyrate with Water-soluble Tetrazolium Salt", Anal. Sci., 2008, 24, 1057.
3) 浅尾浩史 他, "ヤマトトウキの調製過程におけるアンジオテンシンI変換酵素(ACE)阻害活性と品質特性の変化", 近畿中国四国農研究, 2010, 17, 9.
4) C. C. Lau, N. Abdullah and A. S. Shuoib, "Novel angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides derived from an edible mushroom, Pleurotus cystidiosus O.K. Miller identified by LC-MS/MS", BMC Complement. Altern. Med., 2013,13, 313.
5) K. Yamaki, "Screening Research Methods for α-glucosidase Inhibitors and Angiotensin-converting Enzyme Inhibitors in Fermented Soybean Products and Fermented Milk Products", JARQ, 2014, 48, 41.
6) R. Nakabayashi, Z. Yang, T. Nishizawa, T. Mori and K. Saito, "Top-down Targeted Metabolomics Reveals a Sulfur-Containing Metabolite with Inhibitory Activity against Angiotensin-Converting Enzyme in Asparagus officinalis", J. Nat. Prod., 2015, 78(5), 1179.
7) M. Alauddin, H. Shirakawa, K. Hiwatashi, A. Shimakage, S. Takahashi, M. Shinbo and M. Komaia, "Processed soymilk effectively ameliorates blood pressure elevation in spontaneously hypertensive rats", J. Funct. Foods., 2015, 14, 126.
 
備 考
 
 
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