トップページ > 細胞アッセイ

注力製品分類
細胞アッセイ
 
概 要 




 細胞増殖アッセイや細胞アッセイは、ドラッグスクリーニングや各種物質の毒性分析に用いられている。これらのアッセイは、酵素活性や、細胞膜の状態、細胞接着性、ATP生産量、補酵素量、ヌクレオチド取り込み活性などといった細胞機能を対象にしている。広く用いられている方法としては、Trypan Blueの死細胞と生細胞の染め分けによる細胞数計測法があるが、染色されないという条件だけでは、細胞増殖能を持った細胞と増殖能を失った細胞との区別ができない。そのため、酵素活性をベースにした細胞増殖活性測定方法が使用されるようになってきた。

 酵素活性をベースにした細胞増殖活性測定法において、MTTアッセイは、生細胞中のミトコンドリアの脱水素酵素活性をベースにした方法で、最もよく用いられている。MTTは細胞膜を透過し、ミトコンドリアに集積し、補酵素であるリボフラビンにより還元され、紫色のMTTホルマザンとなる。水溶性が低いため、MTTホルマザンは針状結晶となる。したがって吸光度を測定する前に、結晶を有機溶媒で溶解しなければならない。加えて、MTTホルマザンの結晶が析出してくることによって細胞膜が壊れ細胞が死滅してしまう。培地を除く操作では、浮遊してきた細胞を吸い込んでしまい各ウェル間のエラーが大きくなる。

 また、[3H]-チミジン取り込みアッセイは、放射性同位元素を使用しなければならないことや、試薬添加後、データ取得に数日必要であることなどの問題がある。死細胞アッセイで用いられる51Cr放出法は、高感度ではあるものの、やはり放射性同位元素を用いることが制限となる。乳酸脱水素酵素、アデニル酸リン酸化酵素、グルコース6リン酸脱水素酵素などの細胞内酵素は死細胞アッセイ用のマーカーとなるが、乳酸脱水素酵素以外は不安定である。したがって、市販されている試薬は乳酸脱水素酵素を測定するものである。

脱水素酵素を指標としたアッセイ
 小社では各種WSTを開発してきた。WSTは水溶性ホルマザンを生じるため、MTTアッセイで問題となるホルマザンの不溶化を解消できるため、細胞増殖活性測定や死細胞アッセイへの応用が可能である。WST-8は安定で、乳酸脱水素酵素の補酵素であるNADHから電子伝達物質を介して電子を受け取り還元されて高水溶性のWST-8ホルマザンとなる。Cell Counting Kit-8WST-81-Methoxy PMSを含み、冷蔵保存で一年間安定である。
 使用濃度では、WST-8も1-Methoxy PMSも細胞毒性は極めて低く、Cell Counting Kit-8を用いたアッセイの後に、追加でアッセイすることも可能である。脱水素酵素を指標としたアッセイは、複数の要因が関わりあう。たとえば、脱水素酵素、NAD、NADH、ミトコンドリア活性などである。一方MTTアッセイはミトコンドリアの脱水素酵素活性のみであるので、ミトコンドリア活性を反映する。また、Cell Counting Kit-8はMTTよりも高感度に測定ができる。また、ホルマザンが水溶性であるので、溶解のプロセスが不要なため、発色後は直ちに吸光度を測定することができる。

図1 Cell Counting Kit-8の発色機構

エステラーゼ活性を指標としたアッセイ
 Cell Counting Kit-Fは細胞増殖アッセイキットであるが、これは細胞のエステラーゼ活性を指標としたものである。Calcein-AMBCECF-AMCFSEFDAなどは無蛍光であるが、細胞膜を透過し、細胞内のエステラーゼで加水分解され蛍光を発するようになる。したがって、生細胞活性をエステラーゼ活性を指標として測定することができる。細胞膜を透過した後は、加水分解されて蛍光性になるが、化合物によって長時間細胞内にとどまるものと、細胞外に放出されるものがある。

死細胞生細胞同時染色
 細胞群を死んだ細胞と生きている細胞に分別する場合、生細胞は細胞に存在するエステラーゼにより細胞膜透過性のCalcein-AMが細胞内で蛍光性になるが、核酸染色試薬のPropidium iodideは細胞膜を透過できない。したがって、生細胞はCalceinの蛍光を示すことになる。一方、死細胞では膜が破壊されているため、Propidium iodideが透過できるので、核酸とインターカレートし蛍光性になる。これらの波長の異なる蛍光を観察することにより、生細胞と死細胞を分別することができる。
      図2. HeLa細胞のCalcein-AMPIによる二重染色                   
       a) 蛍光顕微鏡像(B励起)
         生細胞の細胞質がCalceinで緑色に、死細胞の核がPIで赤色に染色されている。
       b)フローサイトメーターで測定した際のサイトグラム。生細胞:緑、死細胞:赤。

細胞染色試薬
 蛍光性化合物を使って細胞を可視化する手法は、各種の細胞機能の分析に広く使用されている。細胞の活性や構造をターゲットとした蛍光性化合物が開発されてきた。最も一般的な、細胞膜、タンパクおよび核酸など、細胞構成物を染色するものである。水溶性が高くない分子量の小さい中性の分子やプラス電荷を持つ分子は細胞膜を透過することができ、分子の構造や反応性によっては細胞内に留まることができる。細胞質の染色には、細胞膜透過性で、細胞内エステラーゼで加水分解され細胞内に留まる事ができる蛍光性の分子が用いられる。また、細胞質のタンパクと反応し固定化されることで、長期間安定に細胞を蛍光染色できる。ミトコンドリアは細胞のエネルギー源としてのATPを産生する重要なコンポーネントである。一般的にミトコンドリアは電子伝達系を持っており、酸化還元性色素で染色することができる。プラス電荷を持つ分子はミトコンドリアに集積しやすい。また、核酸染色は、DNAの二重らせん部分にインターカレートし蛍光性を示す化合物や、副溝(minor groove)に結合して蛍光となる化合物が用いられる。核酸染色用試薬は、細胞膜を透過できない分子が多いので、死細胞染色に用いられる。例外的にHoechst色素は細胞膜を透過できる核酸染色剤である。

バクテリア染色
 バクテリアは核酸染色試薬や、細胞染色試薬で染色できるが、細胞膜上に存在する呼吸活性を指標にしたCTCを使って、生菌だけを染色することができる。核酸染色試薬は用いる濃度によって生菌も染色することができるため、CTCとの併用により菌染色を行うことができる。
  
   
製品名                                       製品コード   容 量       価 格    和光コード
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]01-1.細胞増殖/細胞毒性測定用試薬―細胞増殖/細胞毒性アッセ
01-1.細胞増殖/細胞毒性測定用試薬―細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
500回用
2500回用

\16,000
\40,000
 349-06461
 345-06463
100回用
500回用
2500回用
10000回用



\5,200
\13,200
\36,600
\101,000
 341-07761
 347-07621
 343-07623
500回用
\14,000
 343-07743
100tests
500tests
2000tests


\9,600
\25,400
\38,000
 
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]01-2.細胞増殖/細胞毒性測定用試薬―関連試薬
01-2.細胞増殖/細胞毒性測定用試薬―関連試薬
25g
100g
250g
500g
1kg




\2,600
\6,600
\14,400
\23,600
\45,600
 348-01372
 346-01373
 340-01371
 342-01375
 340-01376
20g
100g
500g


\2,200
\9,600
\34,400
 340-08233
 344-08231
 346-08235
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]03-1.分子生物学関連試薬―遺伝子導入試薬
03-1.分子生物学関連試薬―遺伝子導入試薬
1ml
\20,000
 
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]03-2.分子生物学関連試薬―核染色剤
03-2.分子生物学関連試薬―核染色剤
1mg
\5,000
 349-07441
1ml
\5,400
 348-07911
1mg
\4,600
 342-07431
1ml
\5,400
 340-07971
1mg
\4,400
 346-07451
1ml
\5,400
 348-07891
1ml
\4,600
 343-07961
1ml
\4,600
 346-07951
1mg
\4,400
 343-07461
1ml
\5,400
 341-07881
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]03-5.分子生物学関連試薬―関連試薬
03-5.分子生物学関連試薬―関連試薬
20μg
x3
\42,000
 
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]03-6.分子生物学関連試薬―分子生物学用Buffer
03-6.分子生物学関連試薬―分子生物学用Buffer
20g
\7,800
 342-08271
20g
\3,400
 349-08281
20g
\2,800
 346-08291
20g
\2,800
 349-08301
20g
\4,800
 346-08311
20g
\4,000
 343-08321
20g
\3,800
 340-08331
20g
\5,800
 347-08341
1L
\11,200
 347-07481
20g
100g
500g


\2,200
\9,600
\34,400
 340-08233
 344-08231
 346-08235
20g
100g
500g


\2,600
\9,600
\34,800
 347-08243
 341-08241
 343-08245
20g
\2,800
 344-08351
1L
\13,200
 344-07491
20g
100g
500g


\3,400
\9,400
\34,000
 344-08253
 348-08251
 340-08255
500ml
\9,800
 340-07535
500ml
\9,800
 347-07545
20g
\3,200
 341-08361
20g
\5,200
 348-08371
20g
\2,800
 345-08381
1L
\11,200
 344-07511
500ml
\9,400
 344-07555
500ml
\9,400
 348-07575
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]04-1.細胞内蛍光プローブ―細胞内カルシウムイオン測定用試薬
04-1.細胞内蛍光プローブ―細胞内カルシウムイオン測定用試薬
1mg
\14,200
 
2000assays
\69,000
 
10plates
\40,000
 
10plates
\31,000
 
10plates
\49,000
 
10plates
\39,000
 
10plates
\58,000
 
1mg
\26,600
 347-05421
1mg
\30,800
 
1ml
\42,400
 343-05401
1mg
\26,800
 345-05721
1mg
\36,000
 
50μg
x8
\20,000
 348-05831
50μg
x8
\26,200
 349-06961
1mg
\42,200
 
50μg
x8
\30,600
 
1ml
\39,200
 348-05571
50mg
\25,200
 340-04713
1mg
\32,800
 344-05811
1mg
\51,600
 341-05821
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]04-2.細胞内蛍光プローブ―細胞内イオン測定用試薬
04-2.細胞内蛍光プローブ―細胞内イオン測定用試薬
5mg
\13,200
 345-05184
50μg
x8
\16,200
 349-08161
1mg
\31,600
 
5mg
\14,800
 341-07641
50mg
\15,600
 348-06051
1mg
\24,800
 347-07121
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]04-3.細胞内蛍光プローブ―関連試薬
04-3.細胞内蛍光プローブ―関連試薬
100mg
500mg

\4,000
\14,200
 341-05061
 347-05063
1ml
\23,200
 348-05451
1mg
\19,600
 345-05503
25mg
\31,800
 
5g
25g
100g


\3,600
\10,200
\30,600
 348-01311
 346-01312
 342-01314
100μg
1mg

\17,000
\41,600
 347-05781
 343-05783
100mg
\19,600
 340-05411
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]05-1.細胞染色用色素―細胞二重染色キット
05-1.細胞染色用色素―細胞二重染色キット
1set
\36,000
 341-07381
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]05-2.細胞染色用色素―生細胞染色用色素
05-2.細胞染色用色素―生細胞染色用色素
50μg
x8
\16,200
 349-08161
1mg
\13,000
 349-07201
1mg
\5,000
 341-07401
1ml
\15,800
 341-07901
1ml
\13,200
 
1mg
\4,600
 348-07411
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]05-3.細胞染色用色素―死細胞染色用色素
05-3.細胞染色用色素―死細胞染色用色素
1mg
\4,600
 342-07431
1ml
\5,400
 340-07971
1mg
\4,400
 346-07451
1ml
\5,400
 348-07891
1mg
\4,400
 343-07461
1ml
\5,400
 341-07881
5g
\5,400
 345-07421
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]05-4.細胞染色用色素―核染色用色素
05-4.細胞染色用色素―核染色用色素
1mg
\5,000
 349-07441
1ml
\5,400
 348-07911
1ml
\4,600
 343-07961
1ml
\4,600
 346-07951
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]05-5.細胞染色用色素―ミトコンドリア染色用色素
05-5.細胞染色用色素―ミトコンドリア染色用色素
50μg
x8
\16,000
 
1set
\36,000
 
2μg
\20,000
 
50μg
x3
\9,800
 
50μg
x3
\9,800
 
50μg
x3
\9,800
 
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]05-6.細胞染色用色素―組織染色用色素
05-6.細胞染色用色素―組織染色用色素
100μl
\22,400
 
100μl
\27,400
 
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]06-1.細菌研究用試薬―菌増殖アッセイキット
06-1.細菌研究用試薬―菌増殖アッセイキット
500tests
\20,600
 
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]06-2.細菌研究用試薬―菌染色キット
06-2.細菌研究用試薬―菌染色キット
100assays
\21,200
 
100assays
\20,600
 
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]06-3.細菌研究用試薬―菌蛍光染色用色素
06-3.細菌研究用試薬―菌蛍光染色用色素
100Assays
\16,800
 
100Assays
\8,200
 
100Assays
\8,400
 
100Assays
\8,400
 
100Assays
\8,200
 
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]13.生化学用緩衝剤
13.生化学用緩衝剤
20g
\7,800
 342-08271
20g
\3,400
 349-08281
20g
\2,800
 346-08291
20g
\2,800
 349-08301
20g
\4,800
 346-08311
20g
\4,000
 343-08321
20g
\3,800
 340-08331
20g
\5,800
 347-08341
25g
100g
250g
500g
1kg




\2,600
\6,600
\14,400
\23,600
\45,600
 348-01372
 346-01373
 340-01371
 342-01375
 340-01376
20g
100g
500g


\2,200
\9,600
\34,400
 340-08233
 344-08231
 346-08235
20g
100g
500g


\2,600
\9,600
\34,800
 347-08243
 341-08241
 343-08245
20g
\2,800
 344-08351
20g
100g
500g


\3,400
\9,400
\34,000
 344-08253
 348-08251
 340-08255
20g
\3,200
 341-08361
20g
\5,200
 348-08371
20g
\2,800
 345-08381
詳細を隠す:[<div style="width:685px">]14-2.キレート試薬―その他のキレーター
14-2.キレート試薬―その他のキレーター
100mg
500mg

\4,000
\14,200
 341-05061
 347-05063
5g
25g
100g


\3,600
\10,200
\30,600
 348-01311
 346-01312
 342-01314
100mg
\19,600
 340-05411
 
ページの上部へ戻る