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同仁品コード:SG03   製品名:Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal
固定化細胞をフローサイトメーターを用いて検出するプロトコルを教えて下さい。

下記のプロトコルを参照ください。


(1) 細胞を35 mmディッシュに播種し、37℃、5% CO2インキュベーターで一晩培養する。
(2) 培地を吸引除去し、HBSS 2 ml1回洗浄する。
(3) トリプシンで細胞を剥がし、培地500 μlで回収する。
(4) 300×g5分間遠心し、上澄みを除去する。
(5) 2% PFA/PBS 100 μlに懸濁し、室温で5分間固定する。
(6) 300×g5分間遠心し、上澄みを除去する。
(7) HBSS 500 μlに懸濁し、300×g5分間遠心後、上澄みを除去する。これを2回繰り返す。
(8) SPiDER-βGal working solution(固定化細胞用) 500 μlを加え、37℃で30分間インキュベートする。
   ※pHの変動を抑えるため、5% CO2インキュベーターは使用しない。
(9) 300×g5分間遠心し、上澄みを除去する。
(10) HBSS 500 μlに懸濁し、300×g5分間遠心後、上澄みを除去する。これを2回繰り返す。
(11) HBSS 500 μlを加えて細胞を回収し、フローサイトメーターにて解析する。




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